%0 Journal Article
%T 硒蛋白X基因克隆、定点突变、原核表达及多克隆抗体制备
%J 动物营养学报
%D 2015
%R 10.3969/j.issn.1006-267x.2015.05.019
%X 本试验旨在克隆鉴定猪硒蛋白X(SelX)基因,将其定点突变后进行原核表达,获得重组蛋白,并制备猪SelX多克隆抗体,为以猪为模型SelX功能研究奠定基础。利用cDNA末端快速克隆(3'-RACE)技术从猪肝脏总RNA扩增出含开放阅读框(ORF)至poly(A)共1215bp的SelX基因cDNA片段,其348bp的ORF编码区和对应的氨基酸残基与人相应序列分别有88%和91%序列同源性,猪SelX基因提交NCBIGenBank数据库,序列号为EF113597。ORF编码氨基酸残基中硒代半胱氨酸(Sec)位于C-端第95个残基,其编码密码子TGA经定点突变为半胱氨酸(Cys)的TGT后,将其插入载体pET30,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.5mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导2h获得融合表达产物,经His-tag亲和层析后,获得分子质量为18.0ku的纯化蛋白。将纯化获得的SelX基因突变体融合蛋白(SelXm)免疫兔子,得到效价高达1:20000的多克隆抗体,免疫印迹(Western-blot)结果显示该抗体能特异性识别纯化的SelXm和猪肝脏中相应SelX。本试验成功克隆并鉴定了猪SelX基因,并制备了其多克隆抗体。
%K 猪SelX基因
%K 克隆
%K 定点突变
%K 原核表达
%K 多克隆抗体
%U http://www.chinajan.com/CN/abstract/abstract11917.shtml