%0 Journal Article
%T 利用烟草的cDNA酵母表达文库筛选镉胁迫相关基因
%A 李静
%A 王晶
%A 张美
%J 河南农业科学
%P 46-49
%D 2013
%X 为了鉴定烟草在重金属镉胁迫处理下的功能基因,构建烟草cDNA酵母表达文库,并利用镉敏感的突变株对文库进行初步筛选。首先将烟草幼苗进行重金属胁迫处理,然后取幼根提取总RNA并纯化mRNA,采用SMART技术反转录成双链cDNA,将cDNA与入门载体pDONR222的同源重组区连接,再转到酵母表达载体pDEST22上,构建了Gateway技术兼容的酵母cDNA表达文库。经检测,构建的cDNA酵母表达文库滴度为4.32×106cfu/mL,库容量为0.86×107cfu,平均插入片段长度大于1kb,文库质量较高。通过镉敏感酵母突变株Δycf1筛选烟草重金属镉胁迫相关基因,获得酵母单克隆70个。经分析可知,其涉及到谷胱甘肽转移酶、铜分子伴侣及甲硫蛋白等24个不同蛋白基因,初步鉴定为烟草应答重金属镉胁迫的候选基因。
%K 烟草
%K 重金属
%K 镉胁迫
%K cDNA文库
%K 功能基因
%U http://www.hnnykx.org.cn/CN/abstract/abstract860.shtml