%0 Journal Article
%T 猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
%A 王蕊
%A 张改平
%A 乔松林
%A 刘永晖
%A 蒋志政
%A 万博
%A 鲍登克
%A 王爱萍
%J 河南农业科学
%D 2012
%X 为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBRGreen-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线。结果表明,β-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997;溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL。建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础。
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%K 猪')"href="#">猪
%K 实时荧光定量PCR
%K IFN-&beta
%K 基因
%K IRF-3基因
%U http://www.hnnykx.org.cn/CN/abstract/abstract1265.shtml