%0 Journal Article
%T 基于S蛋白检测猪流行性腹泻抗体间接ELISA方法的建立
%A 邓祖丽颖
%J 河南农业科学
%P 119-123
%D 2013
%X 为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白抗体的间接ELISA方法,应用RT-PCR方法扩增PEDV河南流行毒株S基因794bp片段,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建pET-32a-S重组质粒并转化至宿主菌BL21,在37℃条件下加入IPTG进行诱导表达,经SDSPAGE分析显示,该蛋白以融合蛋白形式高效表达,分子量约为46.9kD;Western-blot分析表明,所表达的重组蛋白具有良好的反应原性。以纯化的S蛋白为包被抗原建立检测PED抗体的间接ELISA方法,试验确定抗原最佳包被量为0.04μg/孔,血清最佳稀释度为1∶100,HRP-IgG二抗最佳稀释度为1∶2000,阳性判定标准为OD450值≥0.24。应用该方法对采自河南省不同地区23个养猪场的279份血清样本进行检测,结果显示,母猪血清样本PED抗体阳性率为97.42%(227/233);育肥和保育猪血清样本阳性率为71.74%(33/46)。试验结果表明,所建立的间接ELISA方法特异性、灵敏性和可重复性良好,可以用于猪群PED抗体水平监测和流行病学调查。
%K 猪流行性腹泻病毒
%K S蛋白
%K 原核表达
%K 酶联免疫吸附试验
%U http://www.hnnykx.org.cn/CN/abstract/abstract554.shtml