%0 Journal Article
%T 小鼠Dishevelled2表达质粒的构建及其在RAW264.7细胞中的表达
%A 黄旭
%A 赵鹃
%A 毛英杰
%A 谷志远
%J 华西口腔医学杂志
%P 306-309
%D 2011
%R 10.3969/j.issn.1000-1182.2011.03.022
%X 目的构建小鼠Dishevelled2（Dvl2）表达质粒，并检测其转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7后的表达，为进一步研究Dvl2在破骨细胞分化和骨重建中的作用、筛选调节骨重建潜在靶点奠定基础。方法根据GenBank小鼠Dvl2cDNA序列设计两条特异性引物，提取RAW264.7细胞总RNA，以RT-PCR获得Dvl2的开放阅读框（ORF），并将其克隆到真核表达质粒pEZ-M29上，酶切电泳，测序鉴定构建的pEZ-M29/Dvl2质粒。用脂质体介导瞬时转染RAW264.7细胞，通过荧光显微镜观察转染效果，实时定量RT-PCR检测Dvl2基因表达情况。结果成功构建pEZ-M29/Dvl2表达载体，酶切电泳和测序结果与目的基因相符；转染RAW264.7细胞后48h，荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达；实时定量RT-PCR可见实验组Dvl2基因较对照组强烈过表达。结论成功构建小鼠Dvl2真核表达质粒pEZ-M29/Dvl2，瞬时转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7可显著提高Dvl2的mRNA水平。
%K Dishevelled2
%K 表达质粒
%K RAW264.7细胞
%K 破骨细胞
%U http://www.hxkqyxzz.net/CN/abstract/abstract190.shtml