%0 Journal Article
%T 一种高效、稳定的可溶性原核表达载体的构建及应用
%A 高闪电
%A 常惠芸
%A 独军政
%A 丛国正
%A 邵军军
%A 林彤
%J 华北农学报
%P 46-49
%D 2009
%R 10.7668/hbnxb.2009.06.009
%X 以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C.将VP1全长编码区替换VP1C,获得重组原核表达载体pET-30a-PelB-VP1.将两种重组质粒分别转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,实现了VP1全长及其C端的可溶性表达,以金属离子螯合层析法分别对表达的VP1及其C端融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白分别在32ku和20ku处有单一目的条带,具有较高的纯度.Westernblot分析,VP1蛋白及其C端均可与牛O型口蹄疫病毒阳性血清反应.对重组菌株的连续传代实验证实了该可溶性表达载体的遗传稳定性,显示了该可溶性原核表达载体在蛋白可溶性表达中的应用价值.
%K 口蹄疫病毒
%K 原核表达
%K 可溶性
%K 信号肽
%U http://www.hbnxb.net/CN/abstract/abstract1731.shtml