%0 Journal Article
%T 棉花GhCOMT3基因的原核表达、纯化及鉴定
%A 李波
%A 倪志勇
%A 范玲
%J 华北农学报
%P 12-16
%D 2010
%R 10.7668/hbnxb.20102.S1.003
%X 为了深入研究GhCOMT3基因的功能,将GhCOMT3基因构建到原核表达载体pET-28a中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。用0.2mmol/LIPTG诱导融合蛋白表达,结果发现,16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达;30℃诱导的蛋白表达量最大,之后对包涵体进行变性溶解,进行SDS-PAGE检测,再经过蛋白标记亲和层析柱(HisTrapTMHP)纯化得到变性的pET-28a-GhCOMT3融合蛋白,用SDS-PAGE和Westernblotting检测纯化效果,鉴定表达产物,目的蛋白相对分子量约为39.119kDa,检测结果与预期一致。结果表明,pET-28a-GhCOMT3蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达产物,为在蛋白水平上研究GhCOMT3基因功能奠定了基础。
%K GhCOMT3
%K 原核表达
%K 蛋白纯化
%K Westernblotting
%U http://www.hbnxb.net/CN/abstract/abstract7304.shtml