%0 Journal Article
%T 肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建
%A 张雪寒
%A 何孔旺
%A 赵攀登
%A 栾晓婷
%A 叶青
%A 温立斌
%A 倪艳秀
%A 周俊明
%A 李彬
%A 王小敏
%A 郭容利
%A 俞正玉
%A 茅爱华
%A 吕立新
%J 华北农学报
%P 76-82
%D 2011
%R 10.7668/hbnxb.2011.05.016
%X 肠出血性大肠杆菌(EnterohemorrhagicEscherichiacoli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shigatoxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被壮观霉素(Spc+)、庆大霉素(Gm+)和卡那霉素(Kan+)基因表达盒所代替,Westernblot鉴定结果显示,O157:H7(△hly△stx△toxB)检测不到相应的Stx、Hly和ToxB蛋白。O157:H7(△hly△stx△toxB)生长特性与亲本株无明显差异。对于HEp-2细胞的粘附能力明显降低。Balb/c小鼠排菌时间和排菌量明显减少和降低。本研究成功获得O157:H7(△hly△stx△toxB),并且明确Stx、Hly和ToxB的缺失导致了O157:H7对HEp-2细胞和Balb/c小鼠的粘附和定植能力降低。本研究旨在为研制EHECO157:H7基因缺失疫苗奠定物质基础。
%K 肠出血性大肠杆菌O157:H7
%K hly
%K stx
%K toxB
%K 缺失株
%K 小鼠
%K 粘附
%U http://www.hbnxb.net/CN/abstract/abstract3116.shtml