%0 Journal Article
%T 棉花GhMDH基因的克隆及其蛋白诱导和酶活性分析
%A 李青
%A 张宁
%A 司怀军
%A 吴家和
%J 华北农学报
%P 13-18
%D 2013
%R 10.3969/j.issn.1000-7091.2013.04.003
%X 分析棉花盐胁迫相关的EST文库,设计特异性引物,利用RACE技术从棉花中克隆出苹果酸脱氢酶(Malatedehydrogenase,MDH)基因,命名为GhMDH。基因全长1130bp,最大开放阅读框1014bp,编码338个氨基酸,分子量为35.495kDa,等电点pI=8.94。将该基因编码区插入到原核表达载体pET23b中,获得pET23b-GhMDH重组载体。利用IPTG诱导表达目标蛋白,发现通常条件下获得的重组蛋白以包涵体的形式存在。对诱导时间、IPTG浓度和温度等条件进行优化,结果表明,除了在28℃低温以下诱导的蛋白有少量为可溶,其他条件诱导的蛋白均以包涵体形式存在。为了得到足够的重组蛋白,对GhMDH包涵体蛋白采用脲素缓冲液溶解,对提取液进行镍亲和层析柱纯化,对洗脱的产物经脲素梯度透析复性。利用生化测定法测定目标蛋白的酶活性,结果表明,克隆的GhMDH基因编码蛋白酶具有脱氢酶活性。以上结果为GhMDH在棉花体内氧化还原动态以及参与抗逆功能等研究提供前提条件。
%K 棉花
%K 苹果酸脱氢酶
%K 基因克隆
%K 诱导表达
%K 包涵体
%U http://www.hbnxb.net/CN/abstract/abstract1634.shtml