%0 Journal Article
%T 少孢节丛孢菌胞外丝氨酸蛋白酶P186基因的克隆、序列分析及表达
%A 赵海龙
%A 孟庆玲
%A 乔军
%A 陈双庆
%A 王国超
%A 谢堃
%A 胡政香
%A 才学鹏
%J 华北农学报
%P 93-97
%D 2014
%R 10.7668/hbnxb.2014.04.015
%X 根据GenBank中少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶P186基因序列设计特异性引物，运用RT-PCR扩增获得目的基因片段，构建重组表达质粒pET32a-P186，转化到大肠杆菌BL21（DE3），以IPTG进行了诱导表达。结果表明，P186基因cDNA全长为1224bp，编码407个氨基酸，其中第1～21位为信号肽序列，氨基酸序列的第156～167位、192～202位、343～353位分别是天冬氨酸（Asp160）、组氨酸（His192）、丝氨酸（Ser345）活性位点所在区域，属于Subtilase家族，包括2个潜在的N-联糖基化位点（Asn249、Asn342）及与底物结合的S1区（SBP）Ser251Ile252Gly253和Ala277Ala278Gly279。SDS-PAGE分析结果显示，表达产物的分子质量约为62kDa。WesternBlot分析结果表明，P186重组蛋白可以与抗蛋白粗提液多克隆抗体发生反应。为了揭示少孢节丛孢菌捕食线虫的分子机制，首次克隆并表达了少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶P186基因，为进一步研究丝氨酸蛋白酶P186的生物学功能奠定了基础。
%K 少孢节丛孢菌
%K 丝氨酸蛋白酶P186
%K 克隆
%K 表达
%U http://www.hbnxb.net/CN/abstract/abstract58.shtml