%0 Journal Article
%T 甘薯近缘种Ipomoeatrifida(Kunth)G.Don基因组Fosmid文库构建及PCR筛选体系建立
%A 李昂
%A 吴志明
%A 周志林
%A 赵冬兰
%A 张安
%A 马代夫
%A 李亚栋
%A 唐君
%A 曹清河
%J 华北农学报
%P 45-50
%D 2014
%R 10.7668/hbnxb.2014.02.008
%X 为挖掘有价值的基因资源,对甘薯近缘种I.trifida的基因组文库进行了研究。通过流式细胞法测定I.trifida(2x,编号DLP4597)基因组大小为531.699Mb。以叶片为材料采用包埋法提取基因组DNA,通过物理剪切进行基因组DNA片段化并进行末端平滑化和磷酸化处理,脉冲场电泳回收33～48kb的DNA片段,然后连接到Fosmid载体pCC1FOS(Epicentre)上,包装转化大肠杆菌EPI300,构建了I.trifida的基因组Fosmid文库,该文库包含101952个单克隆,保存于1062个96孔培养板中,平均插入片段35kb,覆盖基因组约6.7倍,理论上任意片段筛出率达到99.88%。以20个96孔板为一组构建三维PCR筛选体系,共分为53个组(第53组包含22个96孔板),每组包含1个超级池,20个板池,12个列池,8个行池,理论上最多通过93个PCR反应即可筛选到1个阳性单克隆。随机选择来自I.trifida的10个基因进行文库克隆筛选,平均阳性克隆数为8.2个,最少阳性克隆数为3个,最多为16个。
%K 甘薯近缘野生种
%K 基因组
%K Fosmid文库
%K 文库筛选体系
%U http://www.hbnxb.net/CN/abstract/abstract8125.shtml