%0 Journal Article
%T 玉米籽粒蛋白质双向电泳技术体系的优化
%A 石海波
%A 王云生
%A 冯勇
%A 高聚林
%A 白海
%A 苏二虎
%A 张来厚
%A 赵瑞霞
%A 刘志雄
%A 黄灵忠
%A 姜丽丽
%J 华北农学报
%P 171-176
%D 2015
%R 10.7668/hbnxb.2015.01.029
%X 为了获得玉米籽粒双向电泳中蛋白质提取的最佳方法,建立最佳的玉米籽粒蛋白双向电泳技术体系,对酚抽提法、三氯乙酸/丙酮沉淀法(TCA/丙酮沉淀法)和可溶性蛋白提取法3种不同提取方法得到的蛋白质进行了分析,并在相同条件下进行双向电泳比对分析,结果表明:可溶性蛋白提取法获得的蛋白纯度高、浓度适中、双向电泳蛋白质点最丰富,最适合双向电泳研究;利用可溶性蛋白提取法获得的蛋白,对第一向等电聚焦参数等条件,以及不同pH值范围的IPG预制凝胶条进行了比较分析,结果表明:采用pH值3~10的IPG预制凝胶条时,采取电压梯度上升的方式,总聚焦70000Vhs、上样量800μg效果最佳,采用pH值4~7的IPG预制凝胶条时,总聚焦80000Vhs、上样量900μg效果最佳,并且采用pH值4~7的IPG预制凝胶条相比pH值3~10的凝胶条能分离到更多的点,最后结合蛋白质点MALDI-TOF-TOF质谱鉴定分析,建立了一套适用于玉米籽粒的蛋白质双向电泳技术方法,即采用可溶性蛋白提取法提取蛋白,采用24cm、pH值4~7的IPG干胶条,上样900μg电泳效果最佳,等点聚焦程序:500V、1h,1000V、1h,2000V、1h,4000V、2h,8000V、4h,8000V、80000Vhs,500V保持。试验研究为后续玉米籽粒发育差异蛋白研究奠定了技术基础。
%K 玉米
%K 籽粒
%K 蛋白组学
%K 双向电泳
%U http://www.hbnxb.net/CN/abstract/abstract8386.shtml