%0 Journal Article
%T 应用易错PCR定向进化甘油脱氢酶
%A 刘嘉
%A 方柏山
%A 李梓君
%A 杨仲丽
%J 华侨大学学报(自然科学版)
%D 2010
%R 10.11830/ISSN.1000-5013.2010.06.0661
%X 经过连续易错聚合酶链式反应(Error-Prone PCR)向克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)甘油脱氢酶基因中引入突变,并构建突变文库.依据突变体催化番红O显色的特性,采用琼脂平板法和96微孔板法相结合的高通量筛选方法,成功获得突变体gldA-74,其酶活力是亲本重组酶的2.73倍.通过软件对突变体gldA-74酶基因和亲本重组酶基因进行分析对比,发现突变体gldA-74酶基因发生了一处点突变(A964T),该突变使一处氨基酸被取代.将亲本重组酶和进化酶的高效表达产物经Ni柱纯化后,酶学性质的测定结果表明,甘油的Km值由0.58 mmol.L-1升高至0.63 mmol.L-1,而NAD的Km值由0.74 mmol.L-1升高至0.77mmol.L-1,并且酶的最适pH值由原来的11.5升高至12.5,而最适温度由65℃降至55℃.
%K 甘油脱氢酶
%K 克雷伯杆菌
%K 定向进化
%K 易错聚合酶链式反应
%U http://www.hdxb.hqu.edu.cn/oa/DArticle.aspx?type=view&id=201006013