%0 Journal Article
%T 采用易错PCR对粘质沙雷氏菌几丁质酶C进行定向进化
%A 刘嘉
%A 刘治江
%A 施腾鑫
%A 李红然
%A 贺淹才
%J 华侨大学学报(自然科学版)
%D 2010
%R 10.11830/ISSN.1000-5013.2010.01.0058
%X 以重组E.coliBL21(DE3)pLysS/pET22b-Chi C为亲本,采用易错聚合酶链反应(PCR)技术,对粘质沙雷氏菌几丁质酶C基因(Chi C)进行定向进化研究.经过两轮易错PCR后,建立突变体文库,进行平板初筛、包涵体复性及酶活检测复筛,获得一酶活较高的突变酶(Mut-Chi C),其催化活性为亲本重组酶的1.9倍,比活力为出发菌酶活的3.3倍.对突变酶的酶学性质进行初步研究,其最适pH值为5.0,最适温度为60℃,而出发菌该酶的最适温度为40℃.进化酶基因经DNA测序并通过软件与亲本型酶基因进行分析比对,表明突变酶Mut-Chi C基因发生点突变,使4处氨基酸被取代,且均为有义突变.
%K 粘质沙雷氏菌
%K 几丁质酶C
%K 分子定向进化
%K 易错聚合酶链反应
%K 包涵体
%U http://www.hdxb.hqu.edu.cn/oa/DArticle.aspx?type=view&id=201001013