%0 Journal Article
%T 牙龈卟啉单胞菌FtsZ的C末端和N末端氨基酸残基缺失对其GTPase活性的影响
%A 于维先
%A 刘歆婵
%A 王闻天
%A 张玉凤
%A 高爱超
%J 吉林大学学报(医学版)
%P 898-902
%D 2013
%R 10.7694/jldxyxb20130509
%X 目的：探讨牙龈卟啉单胞菌（Pg）丝状温度敏感蛋白质（FtsZ）的C末端和N末端氨基酸残基缺失对其GTPase活性的影响，阐明PgFtsZGTPase的功能区域，为牙周病的防治提供实验依据。方法：将质粒pEZ1(WtPgFtsZ，含野生型PgFtsZ的基因)、pYW1（ZΔC01，从PgFtsZ的C末端去除73个氨基酸残基的变异型）、pYW2（ZΔC02，从PgFtsZ的C末端去除128个氨基酸残基的变异型）、pYWN1（ZΔN01，从PgFtsZ的N末端去除43个氨基酸残基的变异型）和pYWN2（ZΔN02，从PgFtsZ的N末端去除205个氨基酸残基的变异型）分别导入E.coliBL21(DE3)pLysS中表达目的蛋白，然后分离和纯化WtPgFtsZ、ZΔC01、ZΔC02、ZΔN01和ZΔN02，将pET3a载体导入E.coliBL21(DE3)pLysS中作为空白对照。采用Malachitegreenassay法检测WtPgFtsZ、ZΔC01、ZΔC02、ZΔN01和ZΔN02的GTPase活性，沉淀法检测体外聚合功能，光学显微镜下观察WtPgFtsZ和各种变异型PgFtsZs过表达时E.coli细胞形态变化。结果：除ZΔN01外，ZΔC01、ZΔC02和ZΔN02的GTPase的活性值均较WtPgFtsZ降低（P<0.05），10mmol？L-1CaCl2可使WtPgFtsZ和各种变异型PgFtsZs的活性下降（P<0.05）；除ZΔN02以外，10mmol?L-1CaCl2均可诱导WtPgFtsZ、ZΔC01、ZΔC02和ZΔN01的体外聚合反应。WtPgFtsZ、ZΔC01和ZΔC02在E.coli细胞中过表达时，细胞呈细长丝状，与仅含有pET3a载体作为空白对照的E.coli相比细胞明显变长；ZΔN01和ZΔN02在E.coli中过表达时，E.coli细胞形态与仅含有pET3a载体作为空白对照的E.coli细胞形态相似。结论：PgFtsZN末端的ZΔN01和ZΔN02之间的162个氨基酸残基及C末端的128个氨基酸残基与PgFtsZ的GTPase活性有关，二价阳离子Ca2+能抑制PgFtsZ的GTPase活性，促进其体外聚合的功能。
%K 牙龈卟啉单胞菌
%K 丝状温度敏感蛋白质Z
%K N末端
%K C末端
%K GTPase活性
%K Ca2+阳离子
%U http://xuebao.jlu.edu.cn/yxb/CN/abstract/abstract4561.shtml