%0 Journal Article
%T 木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因的克隆与表达
%A 张雪
%A 陈萍
%A 毕云枫
%A 曲宁宁
%A 刘琼
%A 孙鑫泽
%J 吉林大学学报(医学版)
%P 690-693
%D 2013
%R DOI：10.7694/jldxyxb20130410
%X 目的：对木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因(nir)进行克隆并表达，并测定酶的活力，探讨亚硝酸盐还原酶(NiR)对亚硝酸盐的降解特性。方法：提取木糖氧化产碱菌DNA，根据GenBank公布的nir基因序列设计引物，利用PCR技术扩增nir基因，克隆至表达载体pET-28a中，构建重组质粒pET-28a-nir，通过双酶切和测序鉴定后，将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达，获得重组蛋白。将细胞发酵液超声破碎，提取粗酶，测定酶活力。结果：经PCR扩增及测序鉴定得到长度为1083bp的目的片段；经终浓度0.6mmol?L-1IPTG、30℃诱导表达5h，获得相对分子质量为37000的重组蛋白；在pH6.5、反应温度35℃时，测得酶活力为51.74U？mL-1。结论：成功克隆nir基因，在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达，且表达产物有酶活。？
%K 亚硝酸盐还原酶
%K 克隆
%K 基因表达
%U http://xuebao.jlu.edu.cn/yxb/CN/abstract/abstract4518.shtml