%0 Journal Article
%T 干扰素β1a基因真核表达质粒的构建和表达
%A 王妍
%A 黄志立
%A 李艳晖
%A 张丽君
%A 解桂秋
%J 吉林大学学报(医学版)
%P 204-208
%D 2013
%X 目的：构建干扰素β1a(IFN-β1a)的CHO表达体系，探讨人IFN-β1a在真核细胞中的表达效果。方法：采用全基因合成法获取重组人IFN-β1a基因，并通过点突变将IFN-β1a的17位半胱氨酸进行修饰，合成的基因经PCR扩增，连接入pSV2-dhfr质粒中，构建重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β1a。将质粒转染至CHO-dhfr－细胞中，经MTX加压筛选，获得稳定生长的能够持续表达IFN-β1a的单克隆细胞株；提取细胞基因组DNA，进行PCR鉴定。收集细胞培养上清液，采用Wish细胞病变抑制法检测转染细胞中IFN-β1a的抗病毒活性。结果：重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β1a经PCR及双酶切鉴定证明构建正确；以转染细胞基因组DNA为模板，可扩增出IFN-β1a基因；转染后重组细胞表达的IFN-β1a具有抗病毒活性，达到3×105IU·mL－1。结论：IFN-β1a基因真核表达质粒构建成功，并在CHO细胞中成功表达了具有较高生物学活性的IFN-β1a蛋白。
%K 干扰素&beta
%K 1a
%K 真核细胞
%K CHO细胞
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%K 1a
%K 真核细胞
%K CHO细胞
%U http://xuebao.jlu.edu.cn/yxb/CN/abstract/abstract4400.shtml