%0 Journal Article
%T 单重靶向条件复制型腺病毒穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K的构建及鉴定
%A 王宏芳
%A 李金华
%A 刘扬
%A 李艳博
%A 王志成
%A 刘威武
%A 龚守良
%J 吉林大学学报(医学版)
%P 821-824
%D 2010
%X 目的：构建并鉴定一种新型E1A基因CR2区选择性缺失的腺病毒穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K，为包装单重靶向条件复制型腺病毒进行肿瘤基因治疗奠定基础。方法：采用RT-PCR法从人胚肾细胞（293T）中扩增条件复制型腺病毒必需的E1区基因，包括E1A、E1Bp及E1B55K基因片段；重叠PCR法扩增CR2区缺失的E1A基因；采用基因重组技术构建pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K重组质粒，并进行PCR及酶切鉴定。结果：经测序证实获得的E1B55K及CR2区缺失的E1A基因与GenBank公布的完全一致，E1A基因CR2区缺失的pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K质粒经分别经XbaⅠ与KpnⅠ单酶切，得到大小约为817和1244bp的酶切片段，PCR鉴定得到约250及1148bp的基因片段，鉴定结果与预期结果完全一致。结论：E1A基因CR2区选择性缺失的单重靶向条件复制型腺穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K构建成功。
%K 条件复制型腺病毒
%K 穿梭载体
%K E1A基因
%K 条件复制型腺病毒
%K 穿梭载体
%K E1A基因
%U http://xuebao.jlu.edu.cn/yxb/CN/abstract/abstract3730.shtml