%0 Journal Article
%T TaqMan-MGB探针法快速检测对虾Taura 综合征病毒的研究
%A 韦信贤
%A 童桂香
%A 谢宗升
%A 黎小正
%A 吴祥庆
%A 廖永志
%A 黄国秋
%J 海洋科学
%P 37-42
%D 2011
%X 为建立Taura综合征病毒(Taurasyndromevirus,简称TSV)的TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PC方法,根据TSV衣壳蛋白基因保守序列设计引物和TaqMan-MGB探针,扩增产物长度为118bp。将PCR产物克隆到pGM-T载体,重组质粒经筛选鉴定、SalⅠ单酶切,得到线性化转录模板DNA,经体外转录获得标准品RNA。以体外转录的RNA作为模板,进行一步法荧光定量RT-PCR反应,根据RNA模板拷贝数与Ct(Cyclethreshold,Ct)值制备了标准曲线,制作的标准曲线在2×101拷贝/μL≤TSVRNA≤2×107拷贝/μL的范围内具良好的线性关系,可以用于TSV的定量分析,检测灵敏度为20个拷贝数。特异性、重复性试验结果表明,该方法对SPF对虾组织RNA没有扩增反应,表现出良好的特异性;组内和组间实验变异系数分别为0.32%～1.84%和0.79%～2.71%。利用TaqMan-MGB探针建立检测TSV的一步法荧光定量RT-PCR方法可用于对虾TSV的检测。
%K TSV
%K Taqman-MGB
%K 探针
%K 一步法荧光定量RT-PCR
%U http://www.marinejournal.cn/hykx/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20110907&flag=1