%0 Journal Article
%T 利用多克隆抗体检测纺锤体蛋白基因INMAP在肝癌细胞中的表达
%A 朱艳
%A 康璟妍
%A 王钰
%A 孙乐
%A 张海江
%A 梁前进
%J 科技导报
%P 17-21
%D 2015
%R 10.3981/j.issn.1000-7857.2015.01.002
%X 为探究纺锤体蛋白INMAP的功能及其在细胞恶性增殖中发挥的作用,制备INMAP多克隆抗体.利用0.1mmol/LIPTG于16℃诱导His-INMAP融合蛋白进行原核表达,SDS-PAGE及免疫印迹检测蛋白表达.4.0mol/L尿素处理包涵体获得可溶性融合蛋白,镍亲和柱分离纯化融合蛋白抗原并检测蛋白浓度及纯度.以所获抗原免疫4只Balb/c小鼠,收集心脏抗血清.以纯化前、后的原核表达产物作为抗原,检测INMAP多克隆抗体的特异性.通过免疫印迹分析INMAP在正常肝细胞系L-02及5个肝癌细胞系(PLC、HepG2、SUN449、SMMC-7721和BEL-7402)中的表达差异.结果显示,His-INMAP融合蛋白主要以包涵体形式存在,经4.0mol/L尿素处理可获得可溶性目的蛋白,且纯化后的抗原纯度较高(94.1%).INMAP多克隆抗体能与INMAP抗原特异结合.INMAP在6种肝细胞中具有多态性,除PLC外,在其他肝癌细胞中其基因表达水平显著下调.本研究制备的INMAP多克隆抗体特异性高,为INMAP基因功能的进一步研究奠定了基础.
%K INMAP
%K 肝癌细胞
%K 多克隆抗体
%K 包涵体
%U http://www.kjdb.org/CN/abstract/abstract12350.shtml