%0 Journal Article
%T 2,4-二硝基苯肼柱前衍生高效液相色谱法测定1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数
%A 胡玥
%A 王雪娇
%A 李恒
%A 高文运
%J 分析化学
%P 1859-1864
%D 2012
%R 10.3724/SP.J.1096.2012.20447
%X 利用含羰基化合物与2,4-二硝基苯肼在酸性条件下反应得到的产物腙对紫外-可见光有吸收的特性,采用柱前衍生高效液相色谱法测定了1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数。酶反应产物1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸在碱性磷酸酶的作用下生成去磷酸化产物1-脱氧-D-木酮糖,然后与2,4-二硝基苯肼衍生成腙。衍生化反应的适宜条件为:HClO4浓度为1.5%,反应温度37℃,反应时间60min,2,4-二硝基苯肼与1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的摩尔比为6:1。色谱条件:0-17min,40%-80%甲醇;18-20min,40%甲醇。结果表明,本方法具有较高的灵敏度和良好的线性关系,1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的检出限为1.0mg/L,在0.005-1.0g/L范围内线性相关系数为0.999,相对标准偏差小于5.0%(n=3),标准回收率为102.22%。用本方法测得的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数Km、Vmax和Kcat与文献报道一致。
%K 非甲羟戊酸途径
%K 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶
%K 动力学参数
%K 2
%K 4-二硝基苯肼
%K 高效液相色谱法
%U http://210.14.121.5:8080/fxhx/CN/abstract/abstract13003.htm