%0 Journal Article
%T 高浓度酶快速胶内酶解技术用于磷酸化蛋白质组学分析
%A 刘芳洁
%A 叶明亮
%A 潘彦博
%A 邹汉法
%J 分析化学
%P 1452-1458
%D 2015
%R 10.11895/j.issn.0253-3820.140820
%X 聚丙烯酰胺凝胶电泳是一项高效的蛋白质分离技术,通过与质谱技术联用,可以鉴定成千上万的蛋白质点。但是,复杂繁琐的操作流程限制了它在蛋白质组学研究方面的广泛应用。本研究表明,高浓度的胰蛋白酶并不会影响胶内酶解后磷酸化肽段的富集,反而可以实现快速高效的蛋白酶解,据此建立了一种快捷、高效的蛋白质酶解方法。首先,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,对50μg复杂蛋白样品进行分离,分成5个组分;然后,选择高浓度胰蛋白酶酶解30min;最后,运用固定钛离子亲和色谱小柱离心法富集磷酸化肽段。经液相色谱-串联质谱分析,成功鉴定到约2000个磷酸化位点,而传统方法则只鉴定到不足1500个位点。实验表明,在高浓度胰蛋白酶的促进作用下,胶内酶解过程在0.5h内即可以完成,并且得到比对照组更高的磷酸化位点的鉴定量和更低的酶解漏切率,而传统方法需要16h。这也证实了本方法不仅可以加速酶解反应,同时还能提高蛋白酶解效率。
%K 高浓度酶
%K 胶内酶解
%K 磷酸化蛋白质组学
%U http://210.14.121.5:8080/fxhx/CN/abstract/abstract14000.htm