%0 Journal Article
%T 人钠泵α2亚基M4～M5区片段的克隆、原核表达与纯化
%A 刘志文
%A 连易水
%A 张？
%A 王永利
%A 王伟
%A 赵兴茹
%A 崔京霞
%J 第三军医大学学报
%P 2058-2061
%D 2010
%X 目的　构建钠泵α2亚基第4跨膜区与第5跨膜区之间的蛋白结构域M4～M5的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达和纯化。　方法　通过PCR反应和酶切技术，构建表达载体pET28b(+)？M4~5，并于大肠杆菌E.coliRosetta2进行表达，用6mol/L盐酸胍对表达形成的不溶包涵体进行变性，梯度稀释复性后，用Ni？NTA亲和柱进行纯化，得到目的蛋白，用Westernblot分析表达产物，并采用无机磷法测定其ATP酶活性。　结果　重组表达载体pET28b(+)-M4-5经酶切与测序鉴定证实构建成功；导入大肠杆菌Rosetta2进行表达,表达产物相对分子质量为52×103左右,与预期值相符，表达量占细胞全蛋白的30%左右；SDS-PAGE分析表明，表达产物主要以包涵体形式存在，亲和柱纯化后，目的蛋白的纯度在95%以上；Westernblot分析表明表达产物与抗His抗体特异性结合；重组蛋白的ATP酶活性为（15.3±1.8）mmol？(g？h)-1。　结论　构建了原核表达载体pET28b(+)-M4-5，并在大肠杆菌Rosetta2中成功表达，亲和纯化获得较高纯度的M4～M5融合蛋白。
%K 钠泵α亚基
%K 表达纯化
%K 包涵体
%K 复性
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201004095