%0 Journal Article
%T 肿瘤转移抑制基因Nm23-H1融合蛋白的表达纯化及其功能的初步研究
%A 张志敏
%A 杨雪琴
%A 许文
%A 戴楠
%A 曾林立
%A 李增鹏
%A 王东
%A 王阁
%J 第三军医大学学报
%P 1824-1827
%D 2010
%X 目的利用人Nm23-H1基因原核表达载体，在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白，并对蛋白其活性进行初步分析。方法将重组质粒pET28a-Nm23-H1转化入E.coliBL21(DE3)，IPTG诱导表达并鉴定。用金属螯合层析技术进行蛋白纯化，得到Nm23-H1融合蛋白，用SDS-PAGE及Westernblot鉴定纯化蛋白，并用RP-HPLC法、电泳迁移率变动分析实验检测Nm23-H1融合蛋白的核苷二磷酸激酶（NDPK）活性及核酸内切酶（AP）修复活性。结果转化溶原菌后能够表达目的蛋白，蛋白表达量高，为可溶性蛋白。Ni2+柱纯化后得到Nm23-H1融合蛋白经SDS-PAGE及Westernblot鉴定正确。RP-HPLC法就及电泳迁移率变动分析实验证明所纯化的Nm23-H1融合蛋白具有NDPK活性，不具有AP修复活性，但可以增加APE1蛋白的AP修复活性。结论利用原核表达载体pET28a-Nm23-H1在E.coliBL21(DE3)中高效表达和纯化得到具有NDPK活性，但无AP修复活性的Nm23-H1融合蛋白，此蛋白可以增强APE1蛋白的AP修复活性，共同参与细胞的DNA损伤修复。
%K Nm-H基因
%K 原核表达
%K 蛋白纯化
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201003076