%0 Journal Article
%T 增强型绿色荧光蛋白与Rb94基因共表达载体的构建和表达
%A 郑敏明
%A 周希瑗
%A 王丽萍
%J 第三军医大学学报
%P 1625-1627
%D 2010
%X 目的构建增强型绿色荧光蛋白与Rb94基因的真核共表达载体并鉴定其在真核细胞中的表达。方法用PCR技术对cDNA-Rb质粒中的目的基因片段进行扩增，使用BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切，切胶回收DNA片段。将其连接入pEGFP-C1，构建pEGFP-C1/Rb94真核表达载体并再进行酶切鉴定。将重组质粒用脂质体转染法转染至人视网膜母细胞瘤细胞（HXO-Rb44）中，荧光显微镜下观察EGFP在细胞内的表达，Westernblot检测Rb蛋白的表达情况，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果重组克隆载体内的目的片段序列与Rb94基因序列完全一致。pEGFP-C1/Rb94酶切鉴定结果与预期结果一致。荧光显微镜下观察可见转染后的细胞有荧光出现。Westernblot检测结果表明Rb94基因得到了有效表达。流式细胞仪检测结果显示，含Rb94基因的细胞凋亡率为(21.17±0.45)%，明显高于其他组（P<0.05）。结论成功构建EGFP和Rb94真核共表达载体，并可在真核细胞中有效表达，Rb94对视网膜母细胞瘤细胞有明显抑制生长作用。
%K Rb基因
%K 真核表达载体
%K 人视网膜母细胞瘤细胞
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201002091