%0 Journal Article
%T 慢病毒载体介导的人肝癌HepG2细胞BC047440基因沉默
%A 钟扬
%A 李靖
%A 黄小兵
%A 郑璐
%A 杨彤翰
%A 赵弘智
%A 梁平
%J 第三军医大学学报
%P 744-748
%D 2010
%X 目的　构建BC047440基因RNAi慢病毒干扰载体，并检测其对人肝癌细胞系HepG2细胞中BC047440基因的沉默效果。　方法　针对已经筛选确定的BC047440基因RNAi有效靶序列，合成BC047440基因特异性shRNA序列，退火形成双链DNA，与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pFU-GW-iRNA载体连接产生pFU-GW-shBC047440慢病毒载体，PCR、DNA测序鉴定阳性克隆。用脂质体转染法将pFU-GW-shBC047440、pHelper1.0载体和pHelper2.0载体共转染293T细胞,产生具备感染能力的慢病毒。以293T细胞中绿色荧光蛋白的表达水平测定病毒滴度，并测定其对人肝癌细胞株HepG2细胞最适感染复数（MOI）。以最适MOI感染HepG2细胞，分BC047440-shRNA组、control-shRNA组和HepG2组；RT-PCR和Westernblot检测各组细胞BC047440mRNA及蛋白的表达差异。　结果　经PCR鉴定，成功构建BC047440基因RNAi慢病毒载体。测定慢病毒滴度为5×108TU/ml，其在HepG2细胞中最适MOI为20；RT-PCR和Westernblot检测结果分别显示BC047440-shRNA组中BC047440mRNA及BC047440蛋白表达较control-shRNA组和HepG2组明显降低，control-shRNA组与HepG2组间无明显差异。　结论　成功构建BC047440特异性RNAi慢病毒载体，感染人肝癌细胞系HepG2细胞后，实现了对HepG2细胞中BC047440基因的有效沉默。
%K BC
%K RNA干扰
%K 慢病毒载体
%K 人肝癌细胞系HepG
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=200912241