%0 Journal Article
%T Klotho基因启动子区域定位及活性分析
%A 宋双双
%A 王虎林
%A 司良毅
%J 第三军医大学学报
%P 707-710
%D 2011
%X 目的构建含不同长度klotho基因启动子片段的报告基因载体，研究其在不同细胞系中的转录活性。方法以人全血基因组DNA为模板，克隆长短不同的klotho基因启动子片段，命名为klothoⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ；分别克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic构建真核表达载体；采用Lipofectamine2000将重组质粒分别和pRL-TK共转染HEK293和HeLa细胞，分析不同长度的klotho基因启动子片段在细胞内的转录活性。结果双酶切和测序鉴定均显示表达载体构建成功；klotho基因的核心启动子区域位于-504～-6；双荧光素酶活性检测显示klothoⅢ在2种细胞中的转录活性明显高于klothoⅠ、Ⅱ(P<0.05)，而klothoⅣ的转录活性在HEK293细胞中能维持高水平，在HeLa细胞中显著下降(P<0.01)。结论klotho基因启动子在不同细胞中的转录活性不同，-973～-504区域可能是导致HeLa细胞中klothoⅣ转录活性下降的原因。
%K klotho
%K 基因
%K 启动子
%K 报告基因载体
%K 转录活性
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201012084