%0 Journal Article %T 小鼠肝炎病毒反向斑点杂交检测方法的建立及初步应用 %A 赵婷婷 %A 严磊 %A 魏立雯 %A 韦莉 %A 王会娟 %A 谭毅 %A 赖国旗 %J 第三军医大学学报 %P 1679-1683 %D 2014 %X 目的建立一种反向斑点杂交方法(reversedotblots,RDB)以检测小鼠肝炎病毒。方法用MHV四个毒株分别感染L929细胞,收获病毒提取RNA并逆转录成cDNA;根据MHV保守区基因组序列设计引物和探针,将上游引物5′端用生物素标记。进行PCR扩增,应用PCR产物进行反向斑点杂交,优化杂交条件,进行稳定性、特异性和灵敏度实验,建立反向斑点杂交法。用此法和酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)对41只小鼠进行检测。RDB检测结果阳性样本进行T载体克隆测序。结果试剂条4℃保质期为8个月。分别检测MHV、金黄色葡萄球菌、沙门菌和乙型肝炎病毒,仅MHV为阳性,RDB特异性为100%,且MHVPCR产物最低检测限为5ng/μL。41只小鼠经本方法检测后,有5只MHV阳性,分布于3个群,而ELISA检测结果有5只阳性,分布于2个群,阳性样本T载体克隆测序结果与RDB检测结果一致。结论该方法具有简洁明了、稳定可靠、特异性好、灵敏度高等优点,可应用于实验动物小鼠肝炎病毒的检测。 %K MHV %K 实验动物 %K 反向斑点杂交 %U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201401072