%0 Journal Article
%T 核糖核酸酶抑制因子与血管生成素的相互作用
%A 李林
%A 舒静
%A 刘玉林
%A 陈俊霞
%J 第三军医大学学报
%P 1454-1459
%D 2014
%X 目的探讨核糖核酸酶抑制因子（ribonucleaseinhibitor,RI）与血管生成素（angiogenin,ANG）的相互作用。方法利用免疫荧光标记结合共聚焦显微镜技术来确立RI与ANG蛋白在细胞内的共定位。利用激光共聚焦显微镜的荧光共振能量转移（fluorescenceresonanceenergytransfer，FRET）技术验证RI和ANG蛋白的相互作用。构建原核表达质粒pGEX-4T-RI，转化E.coliBL21大肠杆菌(DE3)表达，并经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B（glutathionesepharose4B）纯化GST-RI蛋白，考马斯亮蓝染色和免疫印迹鉴定表达情况，利用GST蛋白沉降技术检测RI与ANG蛋白在体外的结合作用。应用免疫共沉淀（co-immunoprecipitation,Co-IP）实验检测两蛋白在真核细胞内的结合作用。结果细胞内免疫荧光标记的RI和ANG蛋白在激光共聚焦显微镜观察下存在共定位现象。FRET结果显示RI与ANG在细胞内存在相互作用。另外酶切和测序结果证明原核表达质粒pGEX-4T-RI构建成功，GST-RI蛋白诱导表达正确，GST蛋白沉降结果显示RI和ANG蛋白在原核细胞反应体系中存在相互作用。结论RI和ANG蛋白在原核细胞反应体系和真核细胞中均存在相互结合作用。？
%K 核糖核酸酶抑制因子
%K 血管生成素
%K 相互作用
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201312236