%0 Journal Article
%T 稳定表达人胰岛素原突变基因的HepG2细胞构建及其胰岛素分泌
%A 郑宏庭
%A 邓华聪
%A 兰丽珍
%A 方芳
%A 刘金波
%A 李丙蓉
%A 蹇锐
%J 第三军医大学学报
%P 2361-2363
%D 2007
%X 目的构建稳定表达人胰岛素原突变（mutatedhumanproinsulin，mhPINS）基因的HepG2细胞，将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的“胰岛代理细胞”（artificialbetacell）。方法重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317，经G418筛选，NIH3T3细胞测定病毒滴度，获取高滴度的稳定产毒细胞克隆，以PCR进行鉴定。以mhPINS病毒感染HepG2细胞，经G418筛选，对HepG2/mhPINS细胞进行RT-PCR、Westernblot、放免法鉴定，并行葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测。结果所获HepG2/mhPINS细胞生长良好，RT-PCR获得286bp目的条带，Westernblot检测可见34×103的特异性条带，放免法在其培养上清中检测到胰岛素与C肽，而HepG2/pLXSN细胞上述各项检测均为阴性。葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测显示，HepG2/mhPINS细胞在不同葡萄糖浓度（0.1、10、20mmol/L）条件下引起的胰岛素分泌无显著性差异（P>0.05）。结论成功构建稳定表达mhPINS基因的HepG2细胞,其内获得成熟胰岛素的表达与分泌，但其胰岛素分泌对葡萄糖刺激缺乏反应。
%K mhPINS基因
%K 逆转录病毒
%K HepG细胞
%K 胰岛素
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=070966