%0 Journal Article
%T 人肝素酶RNAi序列的筛选及鉴定
%A 熊震
%A 汤旭东
%A 房殿春
%A 陈婷
%A 余松涛
%A 陈陵
%A 罗元辉
%A 杨仕明
%J 第三军医大学学报
%P 1929-1932
%D 2007
%X 目的筛选及鉴定有效人肝素酶（heparanase,Hpa）RNA干扰（RNAinterference）序列。方法通过在线网络软件选择3个HpaRNAi的靶点，再设计1组无关序列作阴性对照。通过基因重组技术，把3个干扰片段及阴性对照片段分别克隆入质粒pGenesile-1，脂质体法稳定转染至HepG2肝癌细胞；经G418抗性筛选后各挑选2个阳性克隆进行扩大培养；Westernblot检测不同克隆肝素酶蛋白的表达水平，并进一步采用RT-PCR验证筛选克隆肝素酶mRNA的表达水平。结果通过在线网络软件设计3个RNA干扰序列，分别为Hpa/RNAi-1：GGCTATCTCTTCTGTTCAA，Hpa/RNAi-2：TCCTGTCCGTCACCATTGA，Hpa/RNAi-3:CTCAGTTGCTCCTGGACTA及阴性对照序列Hpa/RNAi-N:CTACCGTTGTATAGGTGT；测序证实克隆入pGenesil-1载体的3个干扰序列及阴性对照序列与设计序列完全一致；经G418抗性筛选后形成的阳性克隆采用Westernblot检测其肝素酶蛋白的表达，结果表明3个干扰序列对HepG2细胞人肝素酶蛋白的表达均有抑制作用，其中Hpa/RNAi-1和Hpa/RNAi-3干扰链的抑制效果最好，分别达到57%和71%；RT-PCR检测结果亦表明Hpa/RNAi-1和Hpa/RNAi-3序列在mRNA水平对肝素酶有较好的抑制效果。结论成功筛选出有效的人肝素酶RANi序列。
%K 人肝素酶
%K RNA干扰
%K siRNA
%K 肝癌
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=070913