%0 Journal Article
%T Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP的构建及鉴定
%A 王春毅
%A 傅仲学
%J 第三军医大学学报
%P 1293-1297
%D 2007
%X 目的构建特异性强，转染率高，针对人Survivin进行RNA干扰的肿瘤增殖型腺病毒载体(Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP)。方法将针对人Survivin的shRNA的基因序列及EGFP基因序列克隆至肿瘤增殖型腺病毒穿梭质粒pAd-delE1b55kD；HEK-293细胞中包装出毒得到重组腺病毒Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP并测序鉴定。用重组腺病毒感染结肠癌细胞HT-29并检测转染率，用RT-PCR和Westernblot分别检测转染后的HT-29细胞中SurvivinmRNA和蛋白表达的变化。结果序列测定证明针对人Survivin的shRNA序列及EGFP序列被成功构建到肿瘤增殖型腺病毒载体中；Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP对结肠癌细胞HT-29的转染效率显著高于增殖缺陷型腺病毒载体和脂质体载体（P<0.01）；而对肝细胞的转染率则显著低于对结肠癌细胞株HT-29的转染（P<0.01）。与复制缺陷型腺病毒载体和脂质体载体比较，转染Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP后，HT-29细胞中SurvivinmRNA拷贝数及蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论构建成功携带针对人Survivin的shRNA的肿瘤增殖型腺病毒载体Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP，其能选择性地高效转染结肠癌细胞株HT-29并有效干扰Survivin，且较之增殖缺陷型腺病毒载体和脂质体载体具有更高的干扰效率。
%K 肿瘤增殖型腺病毒
%K RNA干扰
%K 存活素
%K 结肠癌
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=061218