%0 Journal Article
%T l-Caldesmon腺病毒的构建及其在ECV304细胞中的表达
%A 褚志刚
%A 张家平
%A 张琼
%A 向飞
%A 宋华培
%A 黄跃生
%J 第三军医大学学报
%P 1145-1147
%D 2007
%X 目的构建含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒表达载体。方法以含有l-Caldesmon全长编码序列的pCGN-CaD为模板，PCR扩增l-Caldesmon，T-A克隆，酶切亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV上，在BJ5183菌内和pAdeasy同源重组，筛选阳性克隆，酶切鉴定，线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增，得到含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒，根据报告基因GFP测定病毒滴度。将收集的病毒液感染ECV304细胞，Westernblot检测l-Caldesmon蛋白的表达。结果成功构建了含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒载体，病毒滴度可达1×109U/ml。重组病毒感染后可使ECV304细胞l-Caldesmon表达较对照组增加5倍。结论该重组腺病毒载体的构建为研究l-Caldesmon蛋白在内皮细胞中的生物学功能提供了一定的工作基础。
%K 腺病毒载体
%K l-Caldesmon
%K ECV细胞
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=070261