%0 Journal Article
%T 小鼠微小RNAmiR-22真核表达载体的构建及功能初步研究
%A 张炜炜
%A 王涛
%A 艾国平
%A 粟永萍
%A 王军平
%A 邹仲敏
%A 邓均
%A 董世武
%J 第三军医大学学报
%P 803-805
%D 2007
%X 目的从基因组DNA扩增miR-22前体对应的基因组片段并克隆到pIRES2-EGFP，构建miR-22的真核表达载体。方法利用PCR技术从基因组DNA扩增miR-22前体对应的基因组片段，克隆到质粒pUCm-T，测序正确后构建到真核表达载体pIRES2-EGFP中，经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定，并进行序列测定。脂质体Lipofectamin2000法转染Hela细胞后G418筛选获得稳定转染克隆，提取总RNA，通过RT-PCR方法对neo片段进行鉴定，采用Northernblot技术检测miR-22的表达。结果PCR扩增得到的334bp片段与预期的miR-22前体对应的基因组片段序列一致；成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/miR-22，测序结果正确。重组质粒转染Hela细胞后，经G418筛选成功获得阳性克隆。Northernblot分析显示miR-22在Hela细胞内高效表达。结论本实验成功克隆了miR-22的前体对应的基因组片段，构建其真核表达载体，并在Hela细胞内获得高表达，为深入研究微小RNAmiR-22的功能奠定了基础。
%K 微小RNA
%K 真核表达载体
%K miR-
%K 基因组片段
%K Hela
%K Northern？
%K blot
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=061466