%0 Journal Article
%T 人TLR9真核表达载体在HEK293T细胞中的表达
%A 丁国富
%A 吴？
%A 蒋为薇
%A 李军
%A 罗平
%A 周红
%J 第三军医大学学报
%P 1246-1248
%D 2008
%X 目的构建人Toll样受体9（TLR9）全长序列与绿色荧光蛋白GFP的重组质粒，观察融合蛋白在HEK293T细胞内表达并检测其应答CpGDNA的能力。方法PCR法扩增TLR9全长，限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切绿色荧光真核表达质粒pcDNA3/GFP和TLR9全长，构建重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP，脂质体转染人胚肾293T细胞（HEK293T），荧光显微镜下观察绿色荧光融合蛋白在细胞内的表达与分布；将重组质粒与NF-κB荧光素酶报告质粒pGL2-luc共转染HEK293T细胞，CpGDNA（10mg/L）刺激后，化学发光法检测细胞内荧光素酶活性。结果成功构建pcDNA3-TLR9/GFP质粒，经酶切及测序分析证实载体构建正确；转染细胞后，在荧光显微镜下观察到TLR9/GFP融合蛋白大量表达；重组质粒与pGL2-luc共转染细胞，应用荧光报告系统检测显示，CpGDNA刺激后荧光素酶活性显著高于生理盐水对照组(P<0.01)。结论重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP在HEK293T细胞中表达的TLR9/GFP绿色荧光融合蛋白，能够识别CpGDNA并诱导增加胞内NF-κB转录活性。
%K Toll样受体
%K 克隆
%K 真核表达
%K 核转录因子-κB
%K 荧光素酶
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=071180