%0 Journal Article
%T TH和GDNF双基因表达载体的构建及其在MES23.5细胞中的表达
%A 刘天蔚
%A 谢俊霞
%J 第三军医大学学报
%P 53-56
%D 2008
%X 目的构建酪氨酸羟化酶（tyrosinehydroxylase,TH）和胶质细胞源性神经营养因子（glialcellline-derivedneurotrophicfactor,GDNF）双基因表达载体并检测其在体外的表达，为帕金森病提供新的治疗措施。方法采用分子克隆技术，从pWAV2-TH质粒酶切获得人TH基因片段，将其克隆入真核表达质粒载体pIRES的上游，构建出pIRES-TH。PCR法扩增小鼠GDNF基因片段，克隆入pIRES-TH的下游，构建出携带TH和GDNF双基因的重组质粒pIRES-TH-GDNF。用酶切电泳验证重组结果的正确性，测序检测质粒重组后的序列。随后将重组质粒用Lipofectamine2000转染至MES23.5细胞，经G418筛选后，以RT-PCR及免疫荧光法检测TH和GDNF基因在mRNA及蛋白水平的表达。结果重组质粒酶切后其片段大小与预期结果相同，测序发现基因序列完全正确。转染后MES23.5细胞中TH和GDNF基因的水平明显升高（P<0.05）。结论重组pIRES-TH-GDNF质粒构建成功并能在体外正确表达TH和GDNF基因。
%K 帕金森病
%K 基因治疗
%K 酪氨酸羟化酶
%K 胶质细胞源性神经营养因子
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=070327