%0 Journal Article
%T CENP-I表达下调对HEK293细胞生长及染色体分离的影响
%A 袁泰先
%A 蔡燕
%A 彭乙华
%A 翁亚光
%A 施琼
%A 刘子杰
%A 刘斌
%A 李素彦
%J 第三军医大学学报
%P 1569-1572
%D 2009
%X 目的构建CENP-I特异性RNA干扰真核表达载体，体外观察抑制CENP-I基因表达对HEK293细胞生长、细胞周期和染色体数目异常率的影响。方法构建CENP-IsiRNA真核表达载体，脂质体法将pGenesil-1空载体和pGenesil-1／CENP-I-siRNA-1、pGenesil-1／CENP-I-siRNA-2、pGenesil-1／CENP-I-siRNA-3真核表达载体分别导入人胚肾HEK293细胞。转染后24、48、72h收集细胞用Westernblot和FQ-PCR检测HEK293细胞内CENP-I蛋白及mRNA水平的表达情况,以确定干扰效果及最佳干扰时间。MTT法检测各实验组细胞生长情况，流式细胞术检测各组细胞的细胞周期分布，Giemsa染色法计数细胞分裂指数，常规法制备染色体标本。结果成功构建CENP-IsiRNA真核表达载体，筛选出具有干扰效果的质粒载体即pGenesil-1/CENP-I-siRNA-3,转染人胚肾HEK293细胞72h后可使CENP-I蛋白及mRNA表达显著下凋。CENP-I表达降低的HEK293细胞生长速度明显减慢(P<0.05)，G2/M期细胞增加，分裂期细胞比例增大。结论RNA干扰有效地特异性抑制着丝粒特异性蛋白质CENP-I的表达。CENP-I的抑制可使人胚肾HEK293细胞生长减慢，增殖能力减弱，使细胞分裂期延长。
%K CENP-I基因
%K RNA干扰
%K 细胞分裂指数
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=200902198