%0 Journal Article
%T 人补体受体1型活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定
%A 刘高科
%A 何莉
%A 杨永涛
%A 汪正清
%J 第三军医大学学报
%P 470-473
%D 2009
%X 目的实现人补体受体1型（complementreceptortype1,CR1）活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的分泌表达。方法用PCR从原核表达质粒pET32a-sCR1-SCR15-18上扩增CR1-SCR15-18的编码基因，并克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9，构建重组质粒pPIC9-CR1-SCR15-18，鉴定后测序；重组质粒电转化整合到毕赤酵母GS115基因组中，菌落PCR技术筛选阳性转化株；经摇瓶发酵和甲醇诱导，SDS-PAGE和Westernblot鉴定目的蛋白的表达；Ni2+-NTAagarose亲和层析纯化目的蛋白，并用体外抑制补体溶血反应实验测定目的蛋白的生物活性。结果成功构建重组表达质粒pPIC9-CR1-SCR15-18；SDS-PAGE和Westernblot证实目的基因在毕赤酵母中成功分泌表达；表达产物经镍柱快速纯化后，能够明显抑制补体的体外溶血。结论在毕赤酵母中成功实现了CR1-SCR15-18蛋白的分泌表达，该蛋白具有较高的抑制补体溶血的生物活性。
%K 补体受体型
%K 毕赤酵母
%K 分泌表达
%K 补体溶血
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=200807155