%0 Journal Article
%T 小鼠CD25分子胞外段的原核表达载体的构建及表达鉴定
%A 徐林
%A 张凤
%A 周涯
%A 罗军敏
%A 覃明
%J 第三军医大学学报
%P 278-281
%D 2010
%X 目的构建小鼠CD25分子胞外段的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达。方法从BALB/c小鼠脾细胞中提取总RNA，利用RT-PCR方法获得CD25分子胞外段序列；将其亚克隆入原核表达载体PET-32a，构建好PET-32a-CD25胞外段，并进行酶切及测序鉴定；将PET-32a-CD25胞外段转染大肠杆菌BL21进行表达，并对表达产物进行纯化和鉴定。结果RT-PCR扩增出708bp的CD25胞外段的基因片段；pET32a-CD25胞外段/BL21经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,相对分子质量约为47×103,重组蛋白用镍树脂纯化后经Westernblot检测显示具有良好的免疫反应性，并且可以在体外有效刺激自体T细胞疫苗免疫小鼠脾细胞的增殖并高分泌IL-4。结论CD25胞外段蛋白在原核细胞中成功表达,纯化后的蛋白保持良好的免疫反应性。
%K CD胞外段
%K 原核表达
%K T细胞疫苗
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=200907097