%0 Journal Article
%T 携SH2-Caspase8融合基因重组腺病毒的构建及对K562细胞增殖的影响
%A 刘双凤
%A 胡晶
%A 曹唯希
%A 史静
%A 彭智
%A 王海霞
%A 李亚娟
%A 冯文莉
%J 第三军医大学学报
%P 1887-1892
%D 2011
%X 目的构建并鉴定携SH2-Caspase8融合基因的重组腺病毒AdE-SC-EGFP及其突变体，观察其对K562细胞增殖的抑制作用。方法采用RT-PCR、重叠PCR扩增SH2-Caspase8融合基因，克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中，构建穿梭质粒pAdT-SC-EGFP，进行酶切和测序鉴定。将PmeⅠ酶切后的穿梭质粒转化pAdEasy-BJ5183感受态，通过细菌内同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒质粒pAdE-SC-EGFP及其突变体，？PacⅠ酶切后将其转染AD293细胞进行包装，PCR和Westernblot鉴定重组腺病毒AdE-SC-EGFP，验证后扩增病毒并测定滴度。结果PCR检测、酶切和测序结果均表明腺病毒穿梭质粒pAdT-SC-EGFP和重组腺病毒质粒pAdE-SC-EGFP构建成功；PCR检测、EGFP表达检测结果证明重组腺病毒AdE-SC-EGFP包装成功,扩增后，滴度可达1.5×1012pfu/ml。感染K562细胞后，Westernblot检测目的蛋白的表达，MTT和半固体集落形成实验检测其对K562细胞生长增殖的影响。结论成功构建并鉴定了携带SH2-Caspase8融合基因的重组腺病毒AdE-SC-EGFP及其突变体；MTT和克隆形成实验证明重组腺病毒AdE-SC-EGFP对BCR-ABL阳性的K562细胞有明显的增殖抑制作用。
%K 细胞增殖
%K SH
%K Caspase
%K 重组腺病毒
%K 构建
%K K细胞
%K bcr-abl？
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201104117