%0 Journal Article
%T 鼠-人嵌合抗粘蛋白1IgG1全抗体的构建及其功能初步分析
%A 陈庆峰
%A 牛兆河
%A 刘翠翠
%A 王笑峰
%A 吴俐
%A 张磊
%J 第三军医大学学报
%P 1771-1774
%D 2012
%X 目的获得鼠-人嵌合抗粘蛋白1(mucin1,MUC1)IgG全抗体，降低鼠源抗MUC1单克隆抗体（monoclonalantibody,mAb）的异种免疫原性，并在哺乳动物细胞中表达制备，初步分析其特性。方法PCR扩增鼠mAb-6E3可变区编码基因，通过特异性限制性酶切位点克隆入含有人源IgG1抗体恒定区的哺乳动物细胞重组表达载体，获得IgG全抗体表达质粒，瞬时转染293T哺乳动物细胞，直接免疫荧光法确定细胞内人源IgG抗体表达，收获转染细胞培养上清，经亲和层析纯化后，经SDS-PAGE蛋白电泳、Westernblot、流式细胞仪检测和表面等离子共振技术等分析所制备IgG抗体分子特点及其与MUC1抗原的结合活性及动力学参数。结果所构建鼠-人嵌合IgG表达质粒能够在哺乳动物细胞中有效表达并分泌到细胞上清，纯化后蛋白质电泳分析与预期IgG抗体分子大小一致，能够与变性或天然状态下的T47D肿瘤细胞表面MUC1特异性结合，经表面等离子共振技术分析表明抗体的亲和力约为KD=2.8×10-7M。结论获得鼠-人嵌合抗MUC1IgG抗体，具有与MUC1特异性结合的生物学活性。
%K 乳腺肿瘤
%K 粘蛋白类
%K 嵌合抗体
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201203039