%0 Journal Article
%T RI基因真核表达载体的构建及其对人脐静脉内皮细胞的影响
%A 李红彦
%A 潘湘阳
%A 姚雪
%A 熊东梅
%A 陈俊霞
%J 第三军医大学学报
%P 1591-1595
%D 2012
%X 目的构建融合表达载体pcDNA3.1-RI，并检测核糖核酸酶抑制因子(ribonucleaseinhibitor，RI)基因与血管生成素(angiogenin,ANG)的关系及对人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)增殖及迁移能力的影响。方法用RT-PCR方法扩增RI基因，酶切后将其插入pcDNA3.1，构建融合表达载体pcDNA3.1-RI，在脂质体介导下转染HUVECs，RT-PCR检测RI、ANG基因的mRNA表达水平；Westernblot检测RI、ANG、MMP-2、MMP-9的表达水平；CO-IP法检测ANG和RI的相互作用，MTT法检测细胞的增殖活力，流式细胞仪检测细胞周期分布。结果真核表达质粒构建成功；转染pcDNA3.1-RI组细胞RI基因的mRNA及蛋白的表达较2个对照组(转染pcDNA3.1空载体组和未转染质粒组)均呈显著性增加(P<0.05)，而ANG基因的mRNA及蛋白的表达均降低(P<0.05)，MMP-2、MMP-9蛋白表达水平亦降低(P<0.05)；CO-IP法检测到ANG和RI在细胞内能结合；转染pcDNA3.1-RI质粒到HUVECs细胞后细胞的增殖活力明显降低(P<0.05)，G0～G1期比例明显增加，S期减少。结论成功构建的真核表达质粒能显著增加RI基因及其蛋白水平的表达，RI可以直接在转录水平上降低ANG的表达，在细胞内与ANG结合，从而影响内皮细胞的增殖、迁移能力。
%K 核糖核酸酶抑制因子
%K 人脐静脉内皮细胞
%K 血管生成素
%K 真核表达
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201202110