%0 Journal Article
%T 慢病毒介导HLA-G转基因小鼠的建立
%A 王露露
%A 刘勤
%A 周晓杨
%A 刘昌峨
%A 王勇
%A 魏泓
%J 第三军医大学学报
%P 1392-1396
%D 2012
%X 目的以慢病毒作为载体建立HLA-G转基因小鼠，为研究HLA-G与移植免疫提供模型动物。方法利用FUW载体，构建含有HLA-G编码序列的慢病毒表达载体FUW-HLA-G。用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.G与重组慢病毒载体质粒FUW-HLA-G共转染293FT细胞，包装成慢病毒。通过同步转染含有绿色荧光标记基因的慢病毒质粒FUGW为参照，测定FUW-HLA-G病毒液的滴度。用显微注射法将浓缩后的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下，建立HLA-G转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因整合，用RT-PCR检测转基因在转录水平的表达，用Westernblot检测HLA-G蛋白的表达。结果载体BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切结果和测序结果显示重组的慢病毒质粒与所设计的序列一致。浓缩和纯化后的病毒液滴度达到109TU/ml以上，符合用慢病毒制备转基因小鼠的要求。PCR筛选出阳性鼠6只，RT-PCR与Westernblot检测结果表明HLA-G基因在F0和F1代转基因小鼠中均有表达。结论通过慢病毒介导的基因转移，成功建立了表达人HLA-G蛋白的转基因小鼠，为研究HLA-G的功能及其在器官或组织移植中的效应提供了动物模型。
%K HLA-G
%K 慢病毒
%K 转基因小鼠
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201112273