%0 Journal Article
%T Cx43基因干扰对大鼠星形胶质细胞谷氨酸基础释放的影响
%A 王凌云
%A 田衍平
%A 牛建钦
%A 肖岚
%J 第三军医大学学报
%P 701-704
%D 2012
%X 目的构建能有效抑制大鼠星形胶质细胞(astrocytes,ASTs）连接蛋白43（connexin43，Cx43）基因表达的siRNA载体，并检测抑制Cx43表达对星形胶质细胞谷氨酸释放的影响。方法合成针对大鼠Cx43基因的siRNA寡核苷酸，构建pGCsi.U6.neo.GFP质粒载体。质粒通过电转方法转染原代星形胶质细胞后，用免疫荧光染色及Westernblot检测转染干扰质粒对大鼠ASTsCx43蛋白表达的影响。用谷氨酸ELISA定量试剂盒检测释放至培养基中谷氨酸的浓度,并用DAPI染色进行细胞计数。结果测序结果显示，Cx43基因的目的片段正确插入载体，并保持正确的读码框。干扰质粒转染ASTs48h后与对照组相比，Cx43蛋白表达明显下降(P<0.05)，细胞存活未受影响，而谷氨酸释放明显减少(P<0.05)。结论成功构建了抑制大鼠Cx43基因表达的siRNA载体，抑制Cx43表达可降低ASTs谷氨酸的基础释放。
%K 连接蛋白
%K siRNA
%K 星形胶质细胞
%K 谷氨酸
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201202139