%0 Journal Article
%T 三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2特异性人源肺癌噬菌体单链抗体的筛选和鉴定
%A 赵文思
%A 罗弋
%A 黎博一
%A 张涛
%J 第三军医大学学报
%P 2343-2347
%D 2015
%X 目的通过噬菌体展示库技术构建人肺癌单链抗体库，并筛选出抗多药耐药蛋白ABCG2的特异性单链抗体。方法取肺腺癌患者癌旁阳性淋巴结提RNA，PCR扩增重链和轻链可变区基因VH、VL，SOE-PCR扩增单链抗体可变区基因scFv，克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E，制备初级抗体库。以A549细胞及ABCG2蛋白对抗体库进行6轮淘选。Westernblot检测单链抗体的可溶性表达和对ABCG2蛋白表达的影响，ELISA和ICC鉴定其特异性，CCK-8检测其顺铂增敏作用。结果成功筛选出抗ABCG2人源肺腺癌噬菌体单链抗体。Westernblot证实其可溶性表达，大小约为34×103且可明显下调ABCG2蛋白的表达。ELISA和ICC检测到该抗体对ABCG2抗原的识别率高达75%，并与A549细胞具有结合特异性。CCK8结果则显示该scFv可增加A549细胞对顺铂的敏感性，明显减小其IC50值。结论成功构建了人源肺腺癌噬菌体单链抗体库，并筛选出了能与ABCG2蛋白特异性结合的单链抗体，为后续体内可视化研究和靶向ABCG2+的肺癌干样细胞奠定基础。
%K 噬菌体单链抗体scFv
%K 肺腺癌
%K ABCG
%K 靶向治疗
%K 化疗增敏
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201508008