%0 Journal Article
%T BPI-LL37抗菌融合蛋白质表达载体的构建与功能鉴定
%A 袁培淞
%A 朱明
%A 郭？
%A 邢伟
%A 李向云
%A 何静
%A 梁华平
%A 蒋东坡
%A 徐祥
%A 黄宏
%J 第三军医大学学报
%P 589-593
%D 2015
%X 目的构建杀菌/通透性增加蛋白和LL37抗菌蛋白的融合蛋白（BPI-LL37）表达载体，获得针对脓毒症治疗的多效抗菌融合蛋白，为脓毒症治疗提供新的措施。方法通过PCR方法从杀菌/通透性增加蛋白（bactericidal/permeability-increasingprotein，BPI）和LL37基因的cDNA中扩增并修饰获得需要的rBPI21和LL37活性片断，构建rBPI21-LL37/LL37-rBPI21融合蛋白的表达载体，构建的表达载体（pLVX-Tight-Puro）上的BPI和LL37基因之间通过柔性片段（GGSGG）连接。之后使用PolyJetTM体外DNA转染试剂转染人肺腺癌细胞A549。通过Westernblot检测真核细胞A549表达融合蛋白的水平，通过抑菌试验验证此融合蛋白的分泌与抗菌能力。结果经限制内酶切酶切、DNA电泳和DNA测序证明融合蛋白表达载体(pLVX-Tight-Puro-BPI-LL-37)构建成功；Westernblot检测结果表明融合蛋白rBPI21-LL37/LL37-rBPI21能被真核细胞A549细胞表达，融合蛋白大小介于25～30×103；抑菌试验进一步验证此融合蛋白具有抑制细菌生长的生物学效应。结论构建的两种rBPI21-LL37/LL37-rBPI21表达载体能够成功转染入人的体细胞，并表达和分泌具有抗菌活性的融合蛋白，该融合蛋白有潜力成为治疗脓毒症的新药。
%K 抗菌蛋白
%K 融合蛋白
%K 杀菌/通透性增加蛋白
%K LL
%K 抗菌
%K 脓毒症
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201409130