%0 Journal Article
%T SPAG6基因RNAi慢病毒载体的构建及其对SKM-1细胞凋亡的影响
%A 杨碧慧
%A 张玉琳
%A 王利
%A 罗小华
%A 陈礼平
%A 杨泽松
%A 刘林
%J 第三军医大学学报
%P 474-479
%D 2015
%X 目的构建SPAG6-shRNA慢病毒载体靶向沉默SPAG6基因，探讨SPAG6基因沉默对人骨髓增生异常综合征（myelodysplasticsyndrome，MDS）细胞株SKM-1细胞增殖及凋亡的影响。方法设计并构建3条针对SPAG6基因的shRNA质粒表达载体，共转染293T细胞后得到可表达SPAG6基因RNAi的慢病毒载体。转染SKM-1细胞，利用流式细胞术检测转染效率，qRT-PCR及Westernblot验证SPAG6基因干扰效果，筛选最佳靶点。CCK-8法检测SPAG6基因沉默对SKM-1细胞生长的影响，流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建SPAG6-shRNA慢病毒载体，流式细胞术检测转染效率均在60%以上。qRT-PCR及Westernblot检测结果显示SPAG6-shRNA3慢病毒载体敲除效率最高，为最佳靶点。SPAG6基因干扰后，干扰组SKM-1细胞的增殖明显受抑，抑制率为(60.18±0.37)%，与阴性对照组相比差别有统计学意义（P<0.05）。干扰组SKM-1细胞凋亡率为(16.32±5.80)%，显著高于阴性对照组[(4.28±0.88)%，P=0.024]及空白对照组[(3.08±1.50)%，P=0.019]。结论SPAG6-shRNA慢病毒载体能有效降低SPAG6基因表达水平，抑制SKM-1细胞增殖并促进其凋亡。
%K SPAG基因
%K 慢病毒
%K RNA干扰
%K 骨髓增殖异常综合征
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201408199