%0 Journal Article
%T 汉坦病毒核蛋白原核表达纯化及其单抗制备
%A 余鹏博
%A 王敬军
%A 张家驹
%A 郝志明
%A 刘中华
%A 董建华
%A 唐青
%A 许文波
%J 中国公共卫生
%P 1445-1447
%D 2005
%R 10.11847/zgggws2005-21-12-20
%X ？目的制备稳定、特异的汉坦病毒核蛋白重组抗原和单克隆抗体。方法构建汉坦病毒(HTNV)-76118株核蛋白原核表达载体(pBV)220-S1.3和(pET)28a-S1.3,大肠埃希菌诱导表达。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blot分析显示,在48kD附近有目的蛋白表达,且有较好的抗原活性。用纯化的包涵体抗原免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经镍合氨基三乙酸(Ni-NAT)亲和纯化的核蛋白包被酶标板,进行ELISA筛选阳性克隆株,并建立细胞系,选2株高效分泌抗核蛋白单克隆抗体(McAb)的阳性杂交瘤细胞,常规制备腹水,进行单抗鉴定。结果成功构建了重组核蛋白原核表达载体pBV220-S1.3和pET28a-S1.3,获得了高纯度重组核蛋白(rNP)及其高效价单克隆抗体2E6和4D8。结论重组核蛋白抗原及其单克隆抗体在流行性出血热的监测、诊断和科研中有重要价值。
%K 汉坦病毒
%K 原核表达
%K 重组核蛋白
%K 单克隆抗体
%U http://manu40.magtech.com.cn/Jweb_zgggws/CN/abstract/abstract15051.shtml