%0 Journal Article
%T H5N1禽流感病毒HA与NA基因克隆及分泌表达
%A 吴蒙
%A 刘宇鸽
%A 李改瑞
%A 彭敬
%A 陆杰
%A 陆家海
%J 中国公共卫生
%P 37-39
%D 2011
%R 10.11847/zgggws2011-27-01-17
%X ？目的克隆和表达H5N1型流感病毒血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因,为制备抗体和亚单位疫苗打基础.方法采用PCR技术扩增H5N1型流感病毒H5A和N1A基因,克隆入含有醇氧化酶-1(AOX1)启动子和分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达载体pPIC9K中,构建重组载体;经电穿孔转化酵母宿主菌GS115,筛选高拷贝重组转化子,筛选后摇瓶培养,1%甲醇诱导表达;诱导培养上清经聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western-blot)检测蛋白表达情况.结果电泳和测序证实成功构建酵母表达载体pPIC9K-H5A和pPIC9K-N1A,重组蛋白在毕赤酵母中可以高效表达,表达蛋白分子量大小约为64和52kD,第3和第4天表达量最高;Western-blot检测显示,目的蛋白能与H5亚型的AIV血清结合.结论成功克隆并表达H5N1型流感病毒HA、NA基因序列,为诊断试剂和疫苗开发等进一步研究奠定基础.
%K 流感病毒
%K H5N1
%K 毕赤酵母
%K 分泌表达
%U http://manu40.magtech.com.cn/Jweb_zgggws/CN/abstract/abstract10683.shtml