%0 Journal Article
%T 刚地弓形虫HSP70真核表达质粒构建及评价
%A 殷丽天
%A 刘阳
%A 孟晓丽
%A 王海龙
%A 刘红丽
%A 殷国荣
%J 中国公共卫生
%P 1191-1193
%D 2012
%R 10.11847/zgggws2012-28-09-18
%X ？目的构建刚地弓形虫热休克蛋白70(TgHSP70)真核表达重组质粒p3×Flag-CMW-14-TgHSP70,并在HEK293T细胞内获得表达,为制备基因疫苗奠定基础。方法扩增TgHSP70基因,双酶切后与真核表达质粒p3×Flag-CMW-14连接,经酶切、PCR及测序鉴定;脂质体法将重组体转染HEK293T细胞中,TgHSP70的表达产物通过RT-PCR和westernblot在基因和蛋白2个水平鉴定。结果PCR扩增获得约495bp的HSP70基因片段,p3×Flag-CMW-14-TgHSP70重组质粒构建成功,经双酶切、PCR及测序鉴定,重组质粒基因序列完全正确;将p3×Flag-CMW-14-TgHSP70转染到HEK293T细胞中,经RT-PCR检测获得预期大小目的基因条带,Western-blot检测表达产物大小约19kDa。结论成功构建了真核表达重组质粒p3×Flag-CMW-14-TgHSP70,并在HEK293T正确表达。
%K 刚地弓形虫
%K 热休克蛋白70(HSP70)
%K 基因重组
%K 真核表达
%U http://manu40.magtech.com.cn/Jweb_zgggws/CN/abstract/abstract8988.shtml